一、實(shí)驗(yàn)原理
膳食纖維又稱為植物細(xì)胞壁,它包括纖維素、半纖維素、木質(zhì)素、果膠、角質(zhì)和二氧化硅等。本實(shí)驗(yàn)用中性洗滌纖維測(cè)定法測(cè)定,該法所測(cè)的膳食纖維為不被人消化系統(tǒng)中的酶所消化,也不被中性洗滌劑溶解的組分。其原理是樣品經(jīng)熱的中性洗滌劑浸煮后,殘?jiān)脽岬恼麴s水充分洗滌,除去樣品中游離淀粉、蛋白質(zhì)、礦物質(zhì),然后加入α淀粉酶溶液以水解結(jié)合態(tài)的淀粉,再用蒸餾水,丙酮依次洗滌,以除去殘存的脂肪、色素等,殘?jiān)?jīng)烘干,即為不溶性膳食纖維。
二、實(shí)驗(yàn)用品
(一)器材
(1)電熱恒溫干燥箱。
(2)恒溫箱。
(3)可調(diào)溫的電爐或可控溫的電熱板。
(4)抽濾裝置(包括抽濾瓶及水泵或真空泵)。
(5)干燥器(用無水氯化鈣或變色硅膠為干燥劑)。
(6)高型燒杯(容量600ml)。
(7)坩堝式耐熱玻璃濾器(容量為60ml,孔徑40~60µm;相當(dāng)于250目~400目)。
(8)耐熱玻璃棉。
(二)試劑
(1)石油醚(沸點(diǎn)范圍35~60℃)。
(2)中性洗滌劑溶液
?18.61g乙二胺四乙酸二鈉和6.81g四硼酸鈉(Na2B4O7.10H2O)用250ml蒸餾水加熱溶解;
30g十二烷基硫酸鈉和10ml(2-ethoxy-ethanol)溶于200ml熱蒸餾水中;
4.56g Na2HPO4溶于150ml蒸餾水,將?‚和ƒ3種溶液合并。然后用磷酸調(diào)節(jié)混合液pH至 6.9~7.1,后加蒸餾水至1000ml,即為中性洗滌溶液。此溶液使用期間如有沉淀生成,需在使用前加熱到60℃,使沉淀溶解。
(3)十氫萘。
(4)α淀粉酶溶液:取0.1mol/LNa2HPO4溶液610ml和0.1mol/L Na2HPO4溶液390ml混勻,配
成pH7.0的磷酸鹽緩沖液。用此緩沖溶液配2.5%酶溶液,離心或過濾,取清液備用。
(5)丙酮。
(6)無水亞硫酸鈉。
(三)材料
小麥麩皮。
三、實(shí)驗(yàn)程序
1、樣品處理
將烘干樣品磨細(xì)過20~30篩。準(zhǔn)確稱取0.500~1.000g置于高型燒杯中。
2. 加試劑
依次加入以下試劑于高型燒杯中:
中性洗滌劑溶液100ml(室溫)
十氫萘2ml(樣品煮沸時(shí)如產(chǎn)生的泡沫不多,則可不加此試劑)。
無水亞硫酸鈉0.5g。
3.熱處理
將上述燒杯置于電爐上加熱,使杯內(nèi)溶液在5~10min內(nèi)煮沸,自沸騰計(jì)時(shí),維持微沸60min。
4.洗滌
將燒杯內(nèi)的內(nèi)容物移入已稱重之耐熱玻璃濾器(內(nèi)鋪有耐熱玻璃棉,并已于110℃烤箱烘至恒重) 內(nèi),抽濾至干,再加入熱蒸餾水(100℃)約100ml洗殘?jiān)?,重?fù)洗3次(用熱蒸餾水量約為 300~500ml)。
5.酶處理
加酶溶液約50ml于濾器中(濾器底部須加塞子,使之不漏溶液),使酶液浸沒殘?jiān)?,并加?shù)滴甲
苯以防腐,然后于恒溫箱37℃放置18h或過夜。
6.洗滌
取出濾器,除去底部的塞子,抽濾,并用熱水約500ml分次洗去酶液。用碘液檢查是否有淀粉殘留,如淀粉已除盡,則可抽干濾液,然后加丙酮洗殘?jiān)楦?,再以丙酮洗一次。若有淀粉殘留?/span>需重復(fù)“酶處理”步驟。
7. 將殘?jiān)盀V器于烘箱中110℃烘至恒重,每次稱重時(shí)應(yīng)先移入干燥器中,冷至室溫后稱量。
8.結(jié)果處理
按下式計(jì)算樣品中膳食纖維含量:
膳食纖維(含灰分)= | (濾器+殘?jiān)┑闹亓?濾器重量 | ×100% |
樣品重量 |
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